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                  GFP綠色熒光蛋白基因標記的觀察方法

                  作者:激發光源事業部時間:2019-09-22 20:08瀏覽4752 次

                  信息摘要:

                  GFP吸收的光譜峰值為395nm(紫外),并有一個峰值為470nm的副吸收峰(藍光);發射光譜峰值為509nm(綠光),并帶有峰值為540nm的側峰(Shouder)。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于該激發光對細胞的傷害小,因此通常多使用該波段光源(多為488nm)

                  GFP是什么?GFP 綠熒光蛋白(Green Fluorescent Portein,GFP)


                  綠色熒光蛋白是一類存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔腸動物體內的生物發光蛋白,當受到紫外或藍光激發時,發射綠色熒光。其特點在于:它產生熒光無需底物或輔因子,發色團是其蛋白質一級序列固有的來源于水母的氨基酸殘基組成。水母的綠色熒光蛋白很穩定,無種屬限制,已在多種動植物細胞中表達成功并產生熒光。GFP 的熒光受外界的影響較小,另外GFP 的檢測十分方便,而對細胞的傷害小。

                  綠色熒光蛋白GFP的發光特性:

                  GFP吸收的光譜峰值為395nm(紫外),并有一個峰值為470nm的副吸收峰(藍光);發射光譜峰值為509nm(綠光),并帶有峰值為540nm的側峰(Shouder)。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于該激發光對細胞的傷害小,因此通常多使用該波段光源(多為488nm)。此外,GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽(FITC)很相似,兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩定,在激發光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素強,特別是在450~490nm藍光波長下穩定。類似的,GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高,抗光漂白能力強,因此適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產生不需要任何外源反應底物,因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白,其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。但因為GFP不是酶,熒光信號沒有酶學放大效果,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白,比如螢火蟲熒光素酶等。

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                  綠色熒光蛋白GFP的常規觀察方法有三種:

                  1.熒光顯微鏡

                   熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) : 熒光顯微鏡是以紫外線為光源, 用以照射被檢物體,使之發出熒光,然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。 細胞中有些物質,如葉綠素等,受紫外線照射后可發熒光;另有一些物質本身雖不能發熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經紫外線照射亦可發熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。目前在常用的方法就是采用熒光顯微鏡觀察,熒光顯微鏡在實驗室普及,但不足的是必須采集葉片或動物切片進行觀察,對培養的標本進行破壞,無法進行活體觀察。

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                  2. 紫外光源

                  采用紫外光源LUYOR-3260UV(又叫紫外線燈、黑光燈 uv lamp,uv light)觀察也非常方便,但如果觀察植物,植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發出熒光,對gfp發出的熒光也會產生干擾,另外,標本長時間在紫外光源照射下對GFP標本組織也會造成破壞。

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                  3.便攜式GFP激發光源

                  采用便攜式GFP激發光源LUYOR-3415(又叫熒光蛋白觀測鏡)是便捷、方便的觀察方法,因GFP在470nm有一個很高的吸收峰,采用 470nm激發光源能夠激發GFP發出明亮的綠色熒光,在觀察gfp熒光時,因為激發光為強烈的藍色光線,佩戴專業的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號。推薦使用美國路陽LUYOR-3260便攜式激發光源。因此,使用便攜式GFP激發光源為方便有效的觀察辦法。


                  熒光蛋白激發光源LUYOR-3415的主要產品應用:

                  檢測轉綠色熒光蛋白(GFP)基因、紅色熒光蛋白(DsRed)基因植物:水稻、小麥、玉米、大豆、棉花、擬南芥

                  檢測轉GFP、DsRed基因動物:小鼠、兔子、猴子等;

                  檢測轉GFP、DsRed基因微生物:細菌、真菌、酵母等;

                  檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達;



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